Перегляд за Автор "Верхуша, В.В."

Зараз показуємо 1 - 3 з 3

Особенности первичной структуры красных флуоресцентных белков, изменяющих спектры флуоресценции во времени
(Харьковский Национальный Университет им. В.Н. Каразина, 2009) Субач, Ф.В.; Морозова, Е.С.; Субач, О.М.; Верхуша, В.В.; Буланкина, Н.И.; Гоэнага, М.В.
Путём направленного сайт-специфического и случайного мутагенеза мономерного красного флуоресцентного белка mCherry были оcзданы три мутантных белка, названных флуоресцентными таймерами (ФТ), которые, в отличие от исходного белка, изменяют со временем флуоресценцию с голубой на красную, и определены их первичные структуры. Выделенные мутантные белки отличаются друг от друга скоростями изменения спектров флуоресценции - большой (БФТ), средней (СФТ) и малой (МФТ). В сравнении с исходным mCherry БФТ содержит 5 аминокислотных замен. Среди них замены Лиз→Aрг, Лей→Tрп, Ала→Сер в позициях 69, 84 и 224 находятся внутри белковой молекулы, а Глу→Лиз, Сер→Tре в позициях 34 и 151 - на её внешней поверхности. В аминокислотной последовательности СФТ найдены 9 замен. Лиз→Aрг, Лей→Tрп, Meт→Илей, Лей→Meт в позициях 69, 84, 152 и 205 - внутренние, и Aсн→Aсп, Tре→Сер, Глн→Лиз, Tир→Цис, Aрг→Гис в позициях 23, 43, 194, 221 и 227- внешние. МФТ имеет только 4 мутации, из которых три: Лиз→Арг, Лей→Tрп, Aлa→Вал в позициях 69, 84 и 179 находятся во внутреннем пространстве молекулы, а одна, в позиции 30, Глу→Вал – на её поверхности. Рассмотрена структурная роль найденных внешних и внутренних аминокислотных замен в формировании флуоресцентных особенностей БФТ, СФТ и МФТ, которые отличают их как от mCherry, так и друг от друга.
Спектральные характеристики красных флуоресцентных белков, изменяющих спектр флуоресценции во времени
(Харьковский Национальный Университет им. В.Н. Каразина, 2009) Субач, Ф.В.; Морозова, Е.С.; Верхуша, В.В.; Перский, Е.Э.
Изучены спектральные характеристики трёх мономерных флуоресцентных белков - флуоресцентных таймеров (ФТ), созданных из исходного белка mCherry. Основной особенностью ФТ является способность изменять свою флуоресценцию с голубой на красную во времени. Полученные варианты характеризуются большим (Б), средним (С) и малым (М), временем созревания хромофора от голубого к красному. Время перехода от голубой флуоресценции к красной обратнопропорционально температуре. При температуре 370 C, максимумы голубой флуоресценции наблюдаются через 0,25, 1,2 и 9,8 часа для очищенных БФТ, СФТ и МФТ, соответственно. Полумаксимумы красной флуоресценции у этих белков наблюдаются через 3,9; 7,1 и 28 часов. У всех трёх вариантов ФТ пики возбуждения и флуоресценции для голубых форм равны 403 нм и 583 нм, а для красных форм – 466 нм и 606 нм соответственно. Флуоресценция всех изученных форм ФТ имеет высокую pH- стабильность в области рН от 4,5 до 7,5 со значением pKa, соответственно, около 3,0 для голубых и 4,1-4,7 для красных форм. Молярные коэффициенты экстинкции и квантовые выходы голубых форм ФТ находятся в пределах 33400-49700 M-1cм-1 и 0,30-0,41, соответственно Коэффициенты экстинкции красных форм ФТ выше, чем для голубых, и варьируют от 75300 M-1cм-1 у БФТ до 84200 M-1cм-1 у МФТ. Квантовые выходы красных форм ФТ находятся в пределах 0,05-0,09. Флуоресцентные свойства исследованных вариантов ФТ позволяют изучать процессы с существенно отличающимися временными характеристиками. Исследованные ФТ можно также использовать при создании пар с зелёными флуоресцентными белками для флуоресцентного индуктивного переноса энергии от голубой формы на зелёную, или от зелёной на красную, что расширяет возможности многоцветной флуоресцентной внутриклеточной детекции.
Флуоресцентные белки красной спектральной области
(Харьковский национальный университет имени В.Н.Каразина (Харьков, Украина), 2009) Морозова, Е.С.; Верхуша, В.В.; Перский, Е.Э.; Morozova, K.S.; Verkhusha, V.V.; Persky, Ye.E.
Визуализация отдельных молекул, внутриклеточных структур, живых клеток и целых модельных организмов является одной из наиболее важных проблем при проведении исследований в области биохимии, биотехнологии, клеточной биологии и биологии развития. В настоящее время для решения таких научных задач широко используются генетически кодируемые флуоресцентные белки, такие как зелёный флуоресцентный белок (GFP) и ему гомологичные, в том числе и новые красные флуоресцентные белки. В этом миниобзоре суммируются сведения о спектральных характеристиках, биохимических свойствах и перспективах применения GFP-подобных белков и, в особенности, красных флуоресцентных белков.